七星配资外泌体miRNA：创新药研发中的生物标志物新星

七星配资

　　外泌体的核心价值：从治疗到诊断突破

　　外泌体（exosomes）是一种富含蛋白质、脂质及功能性RNA，直径约40–160 nm的细胞外囊泡，可稳定存在于多种体液中。其内容物能够反映起源细胞的生理或病理状态，在疾病发生发展与治疗响应等生物过程中起到胞间通讯的作用。

　　根据外泌体的独特生物学活性，其临床应用领域大致分为三种：

　　特殊细胞来源外泌体继承其起源细胞的部分功能，甚至比起源细胞具有更强的功能性和治疗便利性，可通过调节免疫应答、促进血管生成、调节细胞增殖凋亡等途径发挥治疗作用；

　　基于其良好的生物相容性和生物学功能，以及其可跨越生物屏障、稳定性高、毒性低的特点，使它在药物递送领域呈现出巨大优势；

　　外泌体有丰富且稳定的内含信息，且与疾病过程高度相关，在生物标志物的开发和应用中展现出广泛的适用性。

　　临床进展：

　　来自于FDA 临床试验备案数据库（ClinicalTrails.gov）显示目前FDA已有60余项涉及外泌体临床试验的相关备案（统计区间：2020年1月~2025年6月），覆盖呼吸系统疾病、皮肤疾病、骨关节疾病、心脑血管疾病、消化系统疾病等多个领域，显示出全球对外泌体医疗应用的高度关注。

　　外泌体miRNA：液体活检的“黄金标志物”

　　液体活检诊断技术是一种基于体液样本，用于检查分子标志物、肿瘤细胞及其代谢物变化的方法。较组织活检而言，对患者几乎无创，在早期筛查和肿瘤进展监测中展现出旷阔前景。

　　miRNA是一种长度约22nt的非编码单链RNA，在人类种约有2000~3000种，通常可起到识别目标mRNA 3’非翻译区，抑制蛋白质翻译的作用。大量研究发现，外泌体中的miRNA广泛存在于体液中，且分布具有高灵敏度和特异性。与正常组织相比，肿瘤中的外泌体miRNA显著增加，且其特性高度稳定。不同细胞来源的外泌体具有独特的miRNA表达谱，反之，独特的miRNA表达谱可作为鉴别外泌体细胞和组织来源的生物标志物。

　　血浆外泌体在不同储存条件下均表现出较好的稳定性。已有研究表明，于-20℃条件下储存5年的血浆七星配资，其中外泌体RNA总量及单个miRNA水平与新鲜样本无显著性差异。冻融2次的血浆外泌体RNA总量及单个miRNA水平受影响较小。

　　基于其稳定、易采集和内容物特异的特点，外泌体miRNA被认为是最具潜力的非侵入式生物标志物之一，广泛应用于早期诊断、预后评估和药物反应监测等场景。

　　益诺思高效专业的

　　外泌体测序全流程技术平台与服务

　　外泌体miRNA测序工作原理可分6个步骤：

　　样本采集和预处理

　　外泌体miRNA测序适用于多来源样本，包括血浆、脑脊液、唾液、尿液、细胞培养上清等。为避免胞内RNA干扰，样本采集分离后需立即置于冰上或4℃暂存，尽快进行二次离心，去除细胞及细胞碎片，后于-80℃保存运输，避免反复冻融。

　　外泌体分离

　　针对不同样本类型和研究需求，外泌体可通过超速离心、膜亲和、体积排阻色谱、亲和捕获等方法从样本中分离。基于细胞外囊泡研究国际指南（MISEV2023）中的建议，益诺思使用分子尺寸排阻法进行外泌体分离，该方法重复性好，能有效去除小粒径杂质，不依赖抗原结合，可最大限度保留外泌体的多样性、完整性和生物活性。

　　RNA提取

　　使用专用低丰度小RNA提取试剂盒，提取外泌体中RNA，保证miRNA回收率。

　　文库制备

　　使用适用于miRNA的建库流程，于外泌体miRNA两端连接3’和5’测序Adapter，后将RNA反转录为DNA，并对DNA进行PCR扩增及文库构建，对扩增产物进行片段分选，后使用片段分析仪对文库进行质控。

　　上机测序

　　使用miRNA专用的单端测序试剂芯片，对miRNA文库进行二代测序。

　　生信分析

　　将下机数据进行预处理，后通过参考数据库比对和miRNA预测进行miRNA鉴定，对miRNA reads进行定量及差异表达分析。根据不同需求，可定制靶基因预测及通路富集分析，以反应潜在作用途径。